临床上的重要性：
　　由于使用超排卵控制的妇女，在IVF和GIFT手术中平均排出成熟卵10-12个。同时，平均胚胎移植的数目在4个
　　左右。这样，多数的病人有多余的胚胎。这些胚胎可冷冻起来，供以后使用，避免了夫妇再次进行超排卵。

样本：
　　使用的胚胎来源于IVF病人的移植后胚胎。胚胎阶段可从培养第一天的原核阶段胚胎，到培养第二天的2细胞
　　，4细胞阶段胚胎，培养第三天的8细胞胚胎，培养第六天的扩展囊胚。

人类胚胎冷冻保存的日期的选择：
　　1． 一般来讲，原核期胚胎解冻后的妊娠率是12-15%，卵裂期胚胎的妊娠率是8-10%，扩展囊胚的妊娠率是
　　　　12-15%（见Quinn, 1993; In: Assisted Reproductive Technologies, ed RP Marrs, Blackwell
　　　　Scientific, pp 89-107）。使用新型的培养液，可以获得更好的效果。
　　2． 如果病人取卵，只是为了冷冻的话，则全部胚胎应在原核期冷冻。
　　3． 如果病人的原核期胚胎数少于6个，胚胎移植则应选在第一天。但也可以选在第二天和第三天。但是，要
　　　　记住，胚胎的质量随着培养天数的增加而下降。
　　4． 如果病人的原核期胚胎有6-11个，则胚胎移植可选定在培养第三天。剩余的胚胎可在培养第六天，达到
　　　　扩展囊胚阶段时冷冻起来。高质量的胚胎可在培养第三天冷冻。
　　5． 如果病人至少有12个合子，则选择冷冻4个原核期胚胎，剩余的胚胎培养至第三天。培养剩余的胚胎，至
　　　　第六天，在扩展囊胚胎阶段冷冻。如果病人有12个以上的合子，可在原核期多冷冻些胚胎。例如：如果
　　　　有13-16个合子，可冷冻5-8个原核期胚胎，这样，在培养第三天，至少可以有8个原核胚胎发育供移植使
　　　　用。

　　　　以上的胚胎，是指在30微升培养滴中，带有卵丘细胞共同培养的胚胎。

病人准备：
　　胚胎解冻的时期，依赖于女方的月经周期。应在女方的子宫能够接受移植胚胎的时期进行解冻。

适合于胚胎冷冻的病人条件：
　　I、 自然周期：
　　　　病人应该有正常月经周期，内分泌正常，没有黄体障碍或其他的异常。
　　1． 月经第二天或第三天（从月经来的第一天算起），B超检测卵巢大小和子宫内膜厚度，抽血检查雌二醇和
　　　　孕激素水平。
　　2． 第八天开始，每天B超检测卵泡发育状况和血液中E2和孕激素水平。
　　3． 当E2水平达到120 pg/ml 时，检测尿中LH水平。如果出现LH峰，则胚胎移植取消。同时，在下一周期开
　　　　始使用GnRH 调整周期。
　　4． 如果没有出现LH峰，继续B超监测和检测血液中E2水平。当E2水平达到180 pg/ml，卵泡直径大于15毫米
　　　　，内膜厚度超过8毫米时
　　5． 注射5,000单位HCG，原核期胚胎大约在注射HCG后60小时移植；2-4细胞胚胎大约在84小时后移植。例如
　　　　，在星期一下午10点注射HCG，则原核期胚胎移植则在星期四上午10点钟（前后可差2个小时），2-8细胞
　　　　期胚胎可在星期五上午10点钟移植。

　　　　注：双原核期合子可按上述标准解冻，大约半小时到2小时才能移植。
　　　　　　2-8细胞期胚胎培养2-3小时后，才能移植。
　　　　　　囊胚移植在注射HCG后132小时后进行。例如在上面的例子中，囊胚移植可在星期天进行。

　　　　这是完整的操作步骤。为了简化操作步骤，可对该步聚进行适当的调整。例如可以不检测第八天以后的血
　　　　液生殖激素水平，使用检测尿中LH和取代，直到正常的激素水平和B超检测恢复为止。但应该记住的是，
　　　　使用这种简化方法，可能影响到最佳胚胎移植日期的选择，从而容易导致周期取消，或者减少该周期妊娠
　　　　率。

II、 控制周期
　　如果病人有内分泌因素，或者是为了操作简单，可使用控制周期。有许多GnRH降调节方法和E2/P替代疗法，
　　下面只是一个例子。
　　1． 在月经第17天，肌肉注身Lupron (Leuprolide acetate, TAP Phaemaceuticals)，每天1毫克。
　　2． 注射后2-3周，检查卵巢抑制情况，血液中E2应小于50pg/ml，P应小于是1.0 ng/ml。
　　3． 如果E2/P都受到抑制，则早晚口服estrace各1mg。将每天Lupron的注射量降低到0.5mg。这天可称做替
　　　　代周期的第一天，2-4细胞阶段的胚胎可在第十七天进行移植。到第五天之前，每天estrace正常服用。
　　4． 从第六天到第十四天，将estrace的口服用量增加到每天早晨8点，下午4点，下午10点各2mg，从第十三
　　　　天开始中断Lupron。
　　5． 从第十五天开始，早晨8点口服2 mg estrace，下午四点和10点口服1 mg estrace。同时上午8点钟肌肉
　　　　注射孕激素。第十六天激素处理相同。
　　6． 原核期胚胎在第十六天开始解冻，并在2小时以内移植。2-4细胞胚胎在第十七天解冻。6-8细胞胚胎在第
　　　　十八天解冻。囊胚在第二十天解冻。
　　7． 从第十七天开始，早晨8点，下午4点和10点口服estrace 各1mg，同时在上午和下午8点钟注射孕激素
　　　　25mg。
　　8． 患者在第3天，11天，16天，21天，30天分别抽血检查E2和孕激水平。有些诊所会根据检查结果改变外源
　　　　激素的用量。
　　9． 在第三十天检查HCG水平。如果是阳性，则应在第三十天到第一百天，每天上午8点，下午4点和10点口服
　　　　estrace 1 mg，每天注射孕激素0.5mg。

　　使用降调节前，患者应试用一个周期，检查内分泌的抑制和内膜的反应是否正常。在第二十三天，可做内膜活
　　检，如果检测周期结果可以，则可中断孕激素的用药，启动Lupron（0.5 mg/天）。雌激素替代疗法可在月经
　　的第一天（称做第一天）开始。

类型：
　　胚胎来源于IVF手术，用于冷冻的胚胎形态应该好。下面是胚胎分级的标准：
　　1． 原核期胚胎分级标准：
　　　　A级胚胎：胚胎圆形，未收缩，可见两原核靠近，胞质均匀。
　　　　A-B级胚胎：胚胎不圆，或者有些收缩，或原核分离，或胞质不均匀。
　　　　B级胚胎：有上述两项缺点。
　　　　C级胚胎：有上述三项或更多项的缺点心。

　　2． 第二天和第三天，2-8细胞阶段胚胎的分级标准：
　　　　A级胚胎： 卵裂球体积正常，无碎片
　　　　B1级胚胎：卵裂球体积不等，无碎片。或与A级相似，但胞质不均匀。
　　　　B2级胚胎：卵裂球体积相等，碎片少于10%。
　　　　C级胚胎：10-50%碎片率。
　　　　D级胚胎：大于50%碎片率。

　　3． 第六天，受精后140-144小时囊胚分级标准：
　　　　A级：充分扩展囊胚，内细胞团一处，多腺体细胞膜出现。
　　　　B级：没有充分扩展，或者内部有多处细胞团块，或者无明显多腺体细胞膜出现。
　　　　C级：具有两项或多项B中的缺点。

时间选择：
　　1． 合子可从30 ul体积的受精滴中获得。
　　2． 原核期胚胎可使用丙二醇和蔗糖法冷冻。胚胎可从受精滴中直接取出。
　　3． 第二天，选择形态好的4细胞阶段胚胎进行冷冻。（卵裂球均等，少于10%碎片）。
　　4． 胚胎可在受精滴中保存，直至扩展囊胚阶段，
　　5． 如果胚胎在受精后120-144小时阶段到达囊胚阶段，使用甘油蔗糖法冷冻胚胎。

操作条件：
　　操作胚胎时，应按照无菌操作和感染样本的一般规定进行。

设备和试剂：
设备：
　　1．程序控制冷冻仪，例如Planer Kryo 10/1.7 （TS Scientific, Peraskie, PA）。
　　2．带有滑轮和报警器的液氮罐（例如MVE Model XC 47/11）。
　　　 注意：液氮的温度极低（-1960C），操作时使用手套和护目镜以防冻伤。转移液氮时，注意房间的通风。
　　3．0.5cc的冷冻麦管，封口器，盛装液氮和转移麦管的小型瓶，记号笔，置冰钳。其他的消耗品可从MTC，或
　　　 TS Scientific, Minnesota Valley Engineering Inc (Bloomington, MN)或其他供应商处获得。
　　4．160立升的液氮储存罐，例如：VBA Cryogenics，带有连接管、开关和分离器，将液氮转移到储存容器中
　　　 。注意：Kryo 10/1.7型液氮罐需液氮的压力达到22psi。
　　5．二氧化碳培养箱，最佳温度370C，最佳的气体比例是6%CO2:5%O2:89%N2。空气中含5%CO2的比例可以使用
　　　 ，但不是最佳的气体比例。
　　6．生物安全的超净工作台，或层流的房间（例如Baker model no. SG-600, Baker Edgegard models,
　　　 Pure Aire Corp）。工作空间应与工作量相适应。
　　7． 低温离心机，2-80C。（每天检测温度并作记录）。
　　8． 台式离心机（例如 Clay Adams, Model Dynac II, cat.no.0103）。
　　9． 370C水浴（例如 Precision Scientific Model 182 cat no. 66643）。
　　10．注射器，吸管，培养皿，培养瓶，滤器等。
　　　　推荐使用的注射器是全塑料的，无热源体的。Air-Tite, Virginina Beach, VA公司产品。吸管和培养
　　　　皿是Falcon公司产品（1ml 吸管cat.no. 7521; 5ml 吸管cat.no.7543; 10 ml 吸管cat.no.7551;组
　　　　织培养皿60 x 15 mm cat.no. 3002 and 35 x 10 mm cat.no. 3001;平皿60 x 15 mm cat.no.1007;
　　　　组织培养皿cat.no.3037）。塑料管是Falcon公司产品（14ml - Falon #2057: 4 ml - Falcon
　　　　#2054）。培养瓶是Falcon 公司产品（70 ml, cat.no. 3082; 250 ml,cat.no.3083）。滤器是
　　　　Gelman Sciences公司产品（Acrodisc，孔径0.2 um, cat.no. 4192）。应用于1，5，10毫升移液管
　　　　的手动或电动的移液器（例如Drummond Scientific, model no.400100）。
　　11．玻璃的巴吸管，长度5.75"和9"（例如Corning cat.no.7095B-5X and 7095B-9；或者Kimax 　　　　
　　　　cat.no.72050575 and 72050900）：冲洗后，加热灭菌待用。酒精灯或丙烷灯。
　　12．可调的加样枪。0-20ul范围一只，0-200 ul范围一只（例如Pipetman P-20 and P-200），无菌枪头（
　　　　例如Elkay cat.no.000-PIPT-STR）若干。

试剂：
　　1． 商品化IVF试剂，例如Quinn's Advantage Feertilization Medium 或者Quinn's Advantage
　　　　Cleverage Medium 或者Quinn's Advantage Blastocyst Medium (Sage BioPharma,
　　　　SanClemente,CA)，和Hepes-buffered HTF。也可自行配制培养液。
　　2． 人血清白蛋白（HAS）；（SAGE BioPharma）。
　　3． 石蜡油（SAGE BioPharma; Catalog No. 4008）。使用10%（体积比）的HCO3缓冲的HTF平衡，放到
　　　　6%CO2培养箱中过夜，更换新鲜培养液，松一瓶口平衡。
　　4． 冷冻保护剂
　　　　使用过程中，要小心保存使用的三种冷冻保护剂二甲基亚砜DMSO，甘油和丙二醇。DMSO在室温保存时，
　　　　容易被氧化。Sigma Chemical Co. 生产安瓶装的。使用后，剩余的DMSO放到小的试管中，用铝箔包好
　　　　，放到40C保存。此种方式保存的DMSO不能超过4-6周。甘油和丙二醇也是Sigma Chemical Co.的产品。
　　　　在10 ml塑料瓶中40C保存。使用前放置到室温，以减少粘滞性。注意抽取冷冻保护剂的体积要准确。

准备：
I． 冷冻液
　　以下所有的溶液均在使用的当天配置。可在2-80C保存最多两周，可重新使用。这些溶液也有商品化供应SAGE
　　BioPharma, San Clemente, CA。

1．丙二醇（PPD）-蔗糖溶液
　　应用于从原核期胚胎到8细胞阶段胚胎：配制20 ml of Hepes-HTF溶液，添加12 mg/ml HSA (向8.8 ml of
　　Hepes-HTF 中添加1.2ml HSA溶液，其中含有100 mg/ml HSA，SAGE BioPharma)。配制成两个10ml小份。
　　其中一份，加入1.25ml 1，2-丙二醇（PPD）（=1.5M PPD solution）。从此溶液中取出5ml，加入0.342蔗
　　糖（=1.5M PPD+0.2 M sucrose）。三种溶液过滤除菌。使用Hepes-HTF+12mg/ml HSA 溶液稀释1.5M
　　PPD溶液，成为0.5M和1.0M PPD溶液。

注意：SAGE BioPharma的商品化溶液是1.5M PPD+0.1M蔗糖。研究表明，蔗糖浓度降低到0.1M对胚胎冷冻结果没
　　　有影响。
　　　商品化的原核期胚胎到8细胞阶段胚胎冷冻液配套（ART-8014）：
　　　含1.5M PPD+0.2M sucrose 1瓶，1.5M PPD 2瓶，含12mg/ml HSA的Hepes-HTF溶液1瓶

2．甘油-蔗糖溶液
　　应用于高度扩展囊胚。配制2份10ml of Hepes-HTF溶液，添加12mg/ml HSA，每9.5毫升该溶液中加入0.5毫
　　升甘油，这样，甘油的浓度是5%。每9.1毫升该溶液中加入0.9毫升甘油和0.685克的蔗糖，这样，配制的溶液
　　甘油浓度是9%，蔗糖浓度是0.2M。溶液过滤除菌。

　　商品化的囊胚冻液配套（ART-8015）：含5%甘油1瓶，含9%甘油1瓶，含12mg/ml HSA 的Hepes-HTF溶液1瓶

II．解冻后使用的稀释液

　　注：使用PPD/蔗糖冷冻的原核期胚胎和卵裂期胚胎，以及甘油/蔗糖冷冻的囊胚，使用的解冻液是一样的，均
　　　　为0.5 M和0.2M的蔗糖。

这些溶液均可从SAGE BioPharma, San Clemente, CA 购买。也可以自行配制。
1． 含有0.5M蔗糖HEPES-HTF，添加12mg/ml HSA（人血清白蛋白）：向8.8ml of HEPES-HTF溶液中添加1.2ml
　　HSA溶液（100mg/ml），再加入1.712g蔗糖。
2． 有0.2M蔗糖HEPES-HTF，添加12mg/ml HSA (人血清白蛋白)：向8.8ml of HEPES-HTF 溶液中添加1.2ml
　　HSA溶液（100mg/ml），再加入0.685g蔗糖。
3． 待蔗糖完全溶解后，过滤除菌。
　　商品化的解冻液配套（ART-8016）：含0.5M蔗糖1瓶，0.2M蔗糖1瓶，含12mg/ml HSA的Hepes-HTF 溶液1瓶

准备
　　无菌操作：整个操作过程在无菌操作后台中或者层流的空间进行。使用前，用70%酒精擦拭显微镜加热台和实
　　体显微镜上部，操作结束后，使用无菌水擦拭台面后，再用70%酒精擦拭。擦拭可用纸巾和棉巾。

储存要求：
　　所有的溶液，在不同的时候，可在2-80C保存最多两周。

　　所有使用的标签，均应为不干胶式。（例如Avery Dennison, Product No. S-812）。使用铅笔写，绝对不
　　能使用记号笔。培养液要表明培养液名称和制备日期。

质量控制：
　　所有的培养液，HSA，培养皿等，均需要经过小鼠合子培养鉴定。扩展囊胚率应高于80%。培养箱也应通过质
　　量控制。

程序：
　　胚胎的移动，均在拉细的巴氏吸管中进行。巴氏吸管的直径约比胚胎的直径大30-50%。使用口吸器，连接一
　　个过滤器操作巴氏吸管。
I． 冷冻
　　使用五孔板或NUNC四孔板放置溶液，上面铺一层石蜡油。使用巴氏吸管连接麦管，同时在实体显微镜下检测
　　将胚胎装入麦管中。使用1毫升注射器与麦管连接，吸入胚胎冷冻保护液。首先，吸入约1.5厘米高的保护液
　　，这段液体用来使上部的棉塞变湿，从而封住麦管。然后再吸入1厘米高的空气，再吸入4-5厘米高的溶液，
　　此段溶液中有胚胎。最后再吸入大约1.5-2。0厘米长的空气段。利用3-5毫米长的麦管封口。然后，标上病人
　　姓名、胚胎阶段、胚胎数目和时间。

1． 第一、二、三天胚胎（原核期到8细胞期胚胎）丙二醇（PPD）冷冻方法
　　在室温下，将扩展囊胚放入0.5M PPD溶液中，并放置5分钟，1.0M PPD溶液中5分钟，1.5M PPD前，胚胎可在
　　1.5M PPD+0.2M蔗糖溶液中，最多存放5分钟。

2． 使用甘油-蔗糖保存扩展囊胚的方法
　　在室温下，将扩展囊胚放入Hepes-HTF+12mg/ml HSA中5分钟。然后，移到5%甘油溶液中10分钟。然后再移到
　　9% glycerol+0.2M蔗糖溶液中，最后装入麦管。在室温下（20-250C）保存10分钟后，开始冷冻。

II． 冷冻程序
　　使用程序冷冻仪冷冻。例如Planer Kryo 10/1.7
　　冷冻所有阶段胚胎，均使用水平式的冷腔麦管架。同时，使用一个对照麦管，其中加入冷冻保存护液和微型温
　　度检测器，记录冷冻过程中，冷腔的温度变化。开始以20C/分钟的速度，从200C降到-60C。然后在-60C保持
　　12分钟。在进入这个温度后2分钟，使用液氮预冷的金属棒或金属钳植冰。植冰处尽量远离胚胎。植冰后，快
　　速将麦管放入冷腔内，继续10分钟。在这10分钟内，可快速将麦管从冷腔中拿出，观察结晶的状况。在该保
　　持阶段的最后，麦管中的冷冻液应该全部结晶。然后，以0.30C/分钟的速度冷冻到-350C，在此温度，麦管可
　　直接放到液氮中保存。也可使用设置程度，控制温度以500C/分钟的速度从-350C降到-1800C，保存麦管至少
　　2小时后，放入液氮中保存。

快速冷冻程序
　　胚胎放入麦管中后，封口。在泡沫容器中放入一定量的液氮，直接将麦管放入液氮中。放置5分钟后，待麦管
　　周围的液氮快挥发干净时，将麦管移入液氮储存罐。

III． 麦管在液氮中的储存
　　以下所有的步骤均在液氮中进行。注意不要将装有胚胎的麦管在空气中暴露，任何温度的提高，均有害于胚胎
　　。胚胎在放到临时的液氮容器中后，马上移到铝制支架上的塑料管中。有的支架在麦管的上部还有一个塑料塞
　　（例如NUNC cyrovial），整个支架的上部使用保护片保护。在支架的上部使用雕刻仪器和记号笔同时记录，
　　以免造成记录的遗失。使用带颜色的记录铝片也可以。记录片可以固定在支架的上部，病人情况用细的记号笔
　　记录。

IV． 加热程序
　　在上述冷冻程序中以及胚胎投入到液氮中后，胚胎细胞都会发生脱水。这样就需要样本以极快的速度解冻（至
　　少2750C/分钟），这样才能使细胞内的冰快速融化。方法是将麦管在空气中放置20-30秒，然后放到30-
　　350C水浴中，直到冰全部融化。这种方法使可能进入到麦管中的液氮全部释放到水浴中。这种方法解冻，很
　　少造成麦管或内容物的损坏。

Ｖ．稀释程序
　　注：使用PPD/蔗糖冷冻的原核期胚胎和卵裂期胚胎，以及甘油/蔗糖冷冻的囊胚，使用的解冻液是一样的，均
　　为0.5M和0.2M蔗糖。

　　一次解冻一只麦管。将麦管中的液体倒入干净的培养皿中，快速地找到胚胎。尽量少带培养液，将胚胎转移到
　　3毫升0.5M的蔗糖溶液中（ART-8005）。370C放置5分钟，然后在0.2M蔗糖溶液中（ART-8007）370C放置5分
　　钟。每次使用新的移液管，减少冷冻液之间的交叉。建议溶液上覆盖石蜡油，以防止液体的挥发，造成溶液渗
　　透压的改变。

　　胚胎在370C使用六滴解冻缓冲液冲洗（ART-8013）。在大培养皿上滴7滴100微升的解冻缓冲液，上盖石蜡油
　　。胚胎在每个滴中，使用吸管上下吸进、吹出约一分钟。然后移到下一滴中。在第一次冲洗后，使用新的吸管
　　。胚胎洗过六次后，可在第七滴中370C保存30分钟后，进行胚胎移植。或者进行培养。

计算：
　　IVF实验的记录，可手写，也可使用计算机数据管理系统。报告记录内容，例如胚胎在储存罐中的位置，冷冻
　　胚胎的数量，胚胎存活率，妊娠率、种植率等，应每月总结一次。

结果的报告：
　　结果一式两份，一份报告给医生办公室，一份IVF实验室存档。IVF实验室的备份应保存至少两年。

步骤上应注意的事项：
　　胚胎冷冻的主要问题是解冻后胚胎存活率低（<50%）。应遵循以下质量保证原则：
1． 所有参与次冻的人员，都应该有冷冻2细胞和8细胞阶段人胚和鼠胚的经验。冷冻解冻鼠胚后，扩展囊胚的发　　育率应高于50%。至少有5次冷冻实验结果，每次冷冻的胚胎数不少于50个。人类胚胎冷冻的结果，应在过去
　　的24个月之内，至少冷冻过20次，胚胎的存活率高于50%。胚胎存活的标准是在解冻这后4小时之内，原核期
　　和卵裂期和卵裂期胚胎形态不变，扩展囊胚的囊胚腔再次扩展。该项结果可从实验室的报告的文献报告中查出2． 保持每年解冻胚胎的存活率至少在50%。

3． 获得每年次移植的临床妊娠率至少达到10%。

　　如果胚胎的存活率和妊娠率没有达到上述水平，则应使用鼠胚重新检测冷冻程序。

参考范围：
　　胚胎存活的标准是在解冻之后4小时之内，原核期和卵裂期胚胎形态不变，扩展囊胚的囊胚腔再次扩展。按照
　　此标准，解冻后胚胎的平均存活率应高于50%。年平均临床妊娠率至少为10%。

异常结果的程序：
　　如果在两个月之内：胚胎的存活率和妊娠率没有达到上述水平，则应使用鼠胚重新检测冷冻程序

报告格式：
　　使用IVF实验室病人报告表。格式是EGGDATA.DTF，CRYO.DTF，和PRGOUT.DTF。（空白表在#P002"患者检测
　　管理"中附有）。

样本的抛弃：
　　所有体液样本和实验样本的抛弃，均应放入一个特定的，标有"生物危害"的容器中，并按相应的规定处理。

程序的限制性：
　　胚胎冷冻保存的主要限制是选择了质量差的胚胎。因此，应该严格把握胚胎选择的标准，只选择B级及以上的
　　胚胎进行冷冻。因此，使用胚胎培养作为选择胚胎的手段，冷冻扩展囊胚阶段的胚胎。

参考文献：
1． QUINN P(1995) Cryopreservation of embryos and oocytes. In: Infertility Evaluation and
　　Treatment. Eds. WR Keye, RJ Chang, RW Rebar, MR Soules, W.B.Saunders, Philadelphia. 　　
　　Chapter 56, pp 821-40.
2． QUINN P (1993) Cryopreservation. In: Assisted Reproductive Technologies, ed RP Marrs,
　　Blackwell Scientific, pp 89-107

胚胎解冻申请表
我们，_________________________（女方姓名）

和_____________________________（男方姓名）

授权以下人员处理涉及我们的胚胎：

_________________________________________________________医生

地址：____________________________________________________________

这些胚胎的冷冻日期：______________________________________________

目前保存在_____________________________________________________中心。

基于我们的要求，生殖医学中心同意冷冻保存我们的胚胎。胚胎冷冻的程序，按照附于本表后的医生的要求进行。我们同意，在按照医生要求处理胚胎过程中，冷冻人员对胚胎的安全成功受孕。 我们接受以上所述的可能风险。同时免除___________________________生殖医学中心在胚胎超出中心控制以外，对胚胎的可能损伤所负的责任。

我们承认，中心将不对胚胎包装和移植方法的安全性、胚胎的安全解冻以及成功受孕负责。

我们已经认真阅读这项协议，完全理解其中的内容。我们清楚，这项表格的内容是免除责任，签名完全出于自己的意愿。

签名：
女方，日期
男方，日期
证人，日期